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一种石斛种质资源的保存和保存后的恢复方法.pdf

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一种 石斛 种质 资源 保存 恢复 方法
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摘要
申请专利号:

太阳城集团CN200810093954.6

申请日:

20080424

公开号:

CN101564028A

公开日:

20091028

当前法律状态:

有效性:

有效

法律详情:
IPC分类号: A01N3/00,A01H4/00 主分类号: A01N3/00,A01H4/00
申请人: 中国医学科学院药用植物研究所
发明人: 郭顺星,房慧勇,陈晓梅,侯晓强,王春兰,李燕
地址: 100193北京市海淀区马连洼北路151号中国医学科学院药用植物研究所
优先权: CN200810093954A
专利代理机构: 代理人:
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法律状态
申请(专利)号:

CN200810093954.6

授权太阳城集团号:

法律状态太阳城集团日:

法律状态类型:

摘要

太阳城集团本发明属于生物工程技术领域,涉及了一种石斛属植物种质资源的保存和保存后的恢复方法,内容包括种子或原球茎或幼苗的长期保存和恢复生长。应用该项技术保存种质太阳城集团长、种质质量稳定,且种质保存工艺简便,技术稳定可靠,可重复性强,适合大规模石斛属植物种质资源的保存。

权利要求书

1、一种石斛属植物种质资源的保存和保存后的恢复方法,内容包括:(1)石斛属植物的种质材料,种质材料的保存条件为:温度:1-30℃,光照:红光或黄光或绿光或蓝光或无光;(2)保存后的种质的恢复条件为:温度:8-30℃,自然光或日光灯,每日光照1-24小时,光照强度500-6000Lx。2、如权利要求1所述的方法,其特征在于石斛属植物的种质材料为:种子或原球茎或幼苗。3、根据权力要求1所述的方法,该方法可应用于石斛属植物种质资源的研究及规模化生产。

说明书



技术领域

本发明属于生物工程技术领域,具体地说涉及一种石斛属植物种质资源的保存和保存后 的恢复方法。

技术背景

石斛属是兰科植物中的第二个大属。全世界有石斛属植物1600多种,在我国有76种。 约1/4的石斛属植物可作观赏用,以花色艳丽而著称。石斛药用的记载始见于《神农本草经》, 被列为上品,是“九大仙草”之首。根据《中国药典》2005版的记载,石斛具有益胃生津, 滋阴清热的功效,还有利嗓明目,调节人体免疫力作用。可以说石斛集药用和观赏于一体, 具有非常高的价值。国内一些名贵药用石斛资源奇缺,如铁皮石斛、金钗石斛、齿瓣石斛、 鼓槌石斛等等,尤其是铁皮石斛的价格不断飚升,目前干品的价格已经到了每公斤2万多元。 在利益驱动下,产区药农对野生资源毁灭性采挖,加之石斛繁殖率低,生长缓慢等特点,很 多种类处于极度濒危状态,部分名贵野生石斛资源已经列入国家保护植物名录。

目前,对于石斛属植物资源的保存方法主要是通过组织培养获得无菌苗,无菌苗在光照 培养条件下无性繁殖继代,保持资源的延续。该方法存在的问题是多次的无性繁殖继代会导 致种质的优良性状退化甚至消失,表现为植株生长缓慢,开花延迟或花朵变小,有效成分含 量降低,从而造成植株的观赏价值和药用价值大幅度降低,不利于资源的保护。石斛属植物 的蒴果保存期限很短,在常温或0-4℃的低温条件下保存2-3周就会开裂。

太阳城集团为了克服无性繁殖无菌苗保存种质的缺点,同时也为了解决石斛的濒危现状,研究石斛 种质资源的新的保存方法变得日益迫切。结合种子有性繁殖和组织培养技术成熟的优势,我 们发明了一种全新的石斛种质资源保存方法。经检索,国内外未见此方面的报道。

发明内容

太阳城集团本发明的目的是提供一套适合于石斛属植物种子、原球茎或幼苗的长期保存和恢复的技 术方法。该方法操作工艺简便、效率高,种质恢复使用时方便快捷,能够实现大规模的种质 资源保存。

为实现上述目的,本发明提供了如下技术方案:

太阳城集团1、保存的种质材料可以为:种子或原球茎或幼苗;

太阳城集团2、种质材料的保存条件为:温度:1-30℃,光照:红光或黄光或绿光或蓝光或无光。

太阳城集团3、保存后的种质的恢复条件为:温度:8-30℃,自然光或日光灯,每日光照1-24小时, 光照强度500-6000Lx。

该方法可应用于石斛属植物种质资源的研究及规模化生产。

与以往的种质资源保存方法相比,本发明采用的技术方法具有以下优点:

太阳城集团1.保存的种质质量稳定,种质保存太阳城集团长,能够保持种质的优良性状。

2.保存工艺简便,种质失活的风险低。

3.技术稳定,可重复性强。

具体实施方式

下面用实施例来进一步说明本发明的实质性内容。但本发明的内容并不仅仅局限于此。

实施例1:

太阳城集团种质材料为广西南宁铁皮石斛野生植株生长的果实,果实表面消毒后,得到无菌的种子。

太阳城集团种子保存在琼脂培养基上,保存条件为:温度10-15℃,黄光光照。在种质保存1年和2 年后分别取出部分种质材料转移到种质恢复条件下:温度为18-25℃,光照培养,光照为自然 光,每日光照8-10小时,光照强度为1600-2500Lx,在恢复条件下培养一个月后,种子播种 到常规无菌萌发培养基上检查存活情况,培养基组成为:大量元素减半的MS培养基,添加 3.0%蔗糖,0.01%肌醇,0.85%琼脂粉,pH5.7。培养2个月时种子萌发,保存1年的种子的 萌发率为:91.5%,保存2年的种子的萌发率为:90.6%,说明铁皮石斛种子长期保存后,其 萌发能力不下降。萌发的种子继续培养能够形成正常的植株。

实施例2:

种质材料为广西南宁铁皮石斛野生植株生长的果实,果实表面消毒后,得到无菌的种子。

种子播种到常规兰科种子无菌萌发培养基上,培养基为N6培养基,添加5%蔗糖,0.9% 琼脂粉,pH5.8。在温度为25±2℃,每日光照10小时,光照强度为1000Lx的环境中诱导种 子萌发形成幼苗。

6个月后种质材料转移到种质保存条件中:蓝光光照,温度10-15℃。

种质材料保存2年和3年后,将幼苗转移到恢复条件下:温度10-15℃,光照培养,光照 由日光灯产生,每日光照18小时,光照强度为:2500Lx,经过1个月的培养,保存的种质材 料都恢复正常生长。其生物学性状与直接光照培养获得的幼苗相同。由于长期不继代,防止 了幼苗的退化。

实施例3:

太阳城集团在贵州省赤水市的金钗石斛野生抚育区采摘蒴果。果实表面消毒后,得到无菌的种子。

种子播种到琼脂培养基上,保存在种质保存条件中:温度20-25℃,绿光光照。

保存2.5年后,把种质材料转移到恢复环境条件下:温度为:20-25℃,光照培养,光照 由日光灯产生,光照强度为2500Lx,每日光照16小时。在恢复条件下培养一个月后,把种 子播种到常规无菌萌发培养基上检查种子的存活情况,经验证,种子具有活力,种子萌发率 为75.3%,继续培养形成正常植株。

实施例4:

太阳城集团在云南西双版纳采集齿瓣石斛果实,果实表面消毒后,得到无菌的种子。

种子播种到常规兰科种子无菌萌发培养基上,培养基组成为:大量元素减半的MS培养 基,添加3.0%蔗糖,0.01%肌醇,0.85%琼脂粉,pH5.7。培养在温度25±2℃,每日光照12 小时,光照强度为1000Lx的环境中,培养3个月后种子萌发形成幼苗。

太阳城集团把幼苗保存在种质保存条件中:无光照,温度为8-10℃。

太阳城集团保存2年和3年后,把幼苗转移到恢复条件中:温度20-25℃,光照由日光灯产生,光照 强度为1000Lx,每日光照16小时。在恢复条件下培养一个月后,幼苗都恢复正常生长,3 个月后,其生物学性状与直接光照培养获得的幼苗相同。

实施例5:

太阳城集团在云南西双版纳采集长苏石斛果实,表面消毒后,得到无菌的种子。

种子播种到常规兰科种子无菌萌发培养基上,培养基组成为:大量元素减半的MS培养 基,添加3.0%蔗糖,0.01%肌醇,0.85%琼脂粉,pH5.7。培养基组成为:大量元素减半的MS 培养基,添加3.0%蔗糖,0.01%肌醇,0.85%琼脂粉,pH5.7。培养条件为:温度25±2℃,光 照强度为1000Lx,每日光照为12小时,培养2个月后种子萌发形成原球茎。

把上述种质材料保存在种质保存条件中:蓝光光照,温度10-15℃。

保存2年和3年后把种质材料转移到恢复生长的条件下:温度20-25℃,光照为自然光, 光照强度为:2100-3000Lx,每日光照8-10小时,经3个月诱导,种质材料恢复生长形成正 常植株。

实施例6:

在云南西双版纳采集鼓槌石斛的果实,表面消毒后,得到无菌的种子。

种子播种到常规兰科种子无菌萌发培养基上,培养基组成为:大量元素减半的MS培养 基,添加3.0%蔗糖,0.01%肌醇,0.85%琼脂粉,pH5.7。培养条件为:温度25±2℃,光照强 度为1000Lx,每日光照为12小时,培养2个月后种子萌发形成原球茎。

把上述种质材料保存在种质保存条件中:红光光照,温度为:15-20℃。

保存2年和3年后把种质材料转移到恢复生长的条件下:温度20-25℃,光照由日光灯产 生,光照强度为2500Lx,每日光照16小时。经过4个月的恢复生长,种质材料恢复生长形 成正常植株。

比较例:

种子播种到常规兰科种子无菌萌发培养基上,培养基为N6培养基,添加5%蔗糖,0.9% 琼脂粉,pH5.8。在温度为25±2℃,每日光照10小时,光照强度为1000Lx的环境中诱导种 子萌发,4个月后种子萌发形成无菌幼苗。

把无菌幼苗保存在四种条件下:(1)黄光培养;(2)无光培养;(3)蓝光培养;(4)光 照培养,光照由日光灯产生,每日光照12小时,光照强度1500Lx,四种处理的培养温度均 为25±2℃。每种处理设置4个重复,在保存6个月时,测定各处理的生物学性状,结果见表 1。每处理每重复调查20株幼苗取平均数,使用方差分析检验各平均数的显著性。统计结果 表明,(1)(2)(3)号处理组的幼苗生长缓慢,各项生物性状指标的数值,如:株高、茎粗、 鲜重、干重无显著差异,但以上各处理组与(4)号处理组相比,各项指标都有极显著差异。 说明在种质保存环境条件下,幼苗具有较慢的生长速度。

表1光照和培养基对幼苗生长的影响

太阳城集团注:数据为4个重复的平均数,数字右上方的**表示某性状在同一培养基不同环境条件下存 在极显著差异。

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