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一种水产品天然生物保鲜剂及其制备方法和应用.pdf

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一种 水产品 天然 生物 保鲜剂 及其 制备 方法 应用
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摘要
申请专利号:

CN201610256480.7

申请日:

20160422

公开号:

CN105851200A

公开日:

20160817

当前法律状态:

有效性:

审查中

法律详情:
IPC分类号: A23B4/20,A23L3/3562,A23L3/3472,A23L3/3481 主分类号: A23B4/20,A23L3/3562,A23L3/3472,A23L3/3481
申请人: 浙江大学宁波理工学院
发明人: 王进波,齐莉莉,梅乐和,胡升,喻鹏飞
地址: 315199 浙江省宁波市钱湖南路1号
优先权: CN201610256480A
专利代理机构: 宁波诚源专利事务所有限公司 代理人: 邓青玲;陈蕾
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法律状态
申请(专利)号:

CN201610256480.7

授权太阳城集团号:

法律状态太阳城集团日:

法律状态类型:

摘要

太阳城集团本发明涉及一种水产品天然生物保鲜剂,按重量份数计由以下成分组成:硫酸软骨素寡糖16~24份,抗氧化肽35~40份,姜黄提取物41~45份,除菌水300~450份;还涉及该生物保鲜剂的制备方法和在水产品保鲜中的应用。本发明中的生物保鲜剂无毒、无残留、低成本,可有效避免水产品脂肪、蛋白质等不被氧化破坏,并保持水产品鲜亮的色泽;同时,充分利用姜黄提取物的广谱抗菌活性,防止各种水产品常见菌在水产品中保藏过程中的滋生和繁殖,从而对水产品起到有效的保鲜作用,显著延长水产品的保鲜期。此外,该保鲜剂的制备过程中,硫酸软骨素寡糖和抗氧化肽均以水产品加工副产物为原料,可降低生产成本,提升水产品加工的产值,改善环境,具有显著的社会效益。

权利要求书

1.一种水产品天然生物保鲜剂,其特征在于,按重量份数计由以下成分组成:硫酸软骨素寡糖16~24份,抗氧化肽35~40份,姜黄提取物41~45份,除菌水300~450份。2.如权利要求1所述的水产品天然生物保鲜剂,其特征在于,所述硫酸软骨素寡糖以水产品加工中产生的骨质副产物为原料制得。3.一种如权利要求1所述的水产品天然生物保鲜剂的制备方法,其特征在于包括以下步骤:分别制备上述硫酸软骨素寡糖、抗氧化肽以及姜黄提取物,按上述质量份数将硫酸软骨素寡糖、抗氧化肽以及姜黄提取物混合,加入除菌水,搅拌均匀得所需的水产品天然生物保鲜剂。4.如权利要求3所述的制备方法,其特征在于,所述硫酸软骨素寡糖通过以下步骤制得:(1)以金枪鱼骨、鱿鱼喉骨为原料,煮沸后剔除残留的肌肉、脂肪和其他结缔组织,捣碎匀浆后得匀浆液;(2)按照体积比1:1~2在上述匀浆液中加入丙酮,搅拌脱脂2~3h,静置,弃去丙酮层,得脱脂固形物;(3)按固液比1:1~3g/mL向上述脱脂固形物中加入0.5mol/L磷酸盐缓冲液,调节pH为5.0~7.0,搅拌均匀,得混合物;(4)将上述混合物升温至50~60℃,加入菠萝蛋白酶,加酶量为1000~2000U/g,酶解太阳城集团为6~10h,升温至75℃处理10分钟灭酶,得第一次酶解液;(5)调节上述第一次酶解液的pH为8.0~9.0,加入碱性蛋白酶,加酶量为1500~3000U/g,酶解温度为50~55℃,搅拌酶解3~6h,升温至75℃处理10分钟灭酶,得第二次酶解液;(6)将上述第二次酶解液4000~5000rpm离心10min,取上清液;(7)在上述上清液中加入体积分数60~90%的乙醇,pH6.0~8.5条件下,沉淀获得硫酸软骨素;(8)按料液比1:20~25g/mL向上述硫酸软骨素中加入上0.4mol/L盐酸溶液,65~80℃水浴搅拌酸解18~24h;冷却至室温,加入氢氧化钠中和,冷冻干燥,得硫酸软骨素寡糖。5.如权利要求3所述的制备方法,其特征在于,所述抗氧化肽通过以下步骤制得:(1)取洗净后的金枪鱼、鱿鱼加工副产物,组织捣碎匀浆后的匀浆液,备用;(2)按照料液比1:6~9g/mL向上述匀浆液中加入异丙醇,于35~40℃下搅拌脱脂24~48h,然后5000~8000rpm离心15min,弃去上清,收集脱脂固形物沉淀;(3)按固液比1:3~5g/mL向上述脱脂固形物中加入0.5mol/L磷酸盐缓冲液,调节pH为5.0~7.0,搅拌均匀,得混合物。(4)上述混合物搅拌升温至50~60℃,加入风味蛋白酶,加酶量为1000~2000U/g,50~60℃酶解3~6h,得到酶解产物;将上述酶解产物升温至75℃以上,并保持10~15min,灭酶,冷却至室温,于5000rpm离心10min,得到酶解液,冻干得酶解物干粉;(5)将上述酶解物干粉溶于pH6.5~7.5的磷酸盐缓冲液,配成20~25mg/mL的溶液,于0.1~0.15MPa的工作压力和20~25℃的温度下,分别采用截留分子量7kDa、5kDa、3kDa和1kDa的超滤膜对所得酶解产物进行超滤处理,收集各组分,通过测定各组分对DPPH自由基的清除能力,确定各组分的抗氧化能力,收集抗氧化能力最强的组分并制得干粉;(6)将上述抗氧化能力最强的组分用pH6.5~7.5的磷酸盐缓冲液配成20~25mg/mL的溶液,经过葡聚糖凝胶G-25柱层析分离,用pH6.5~7.5磷酸盐缓冲液进行洗脱,根据220nm下的吸光度曲线收集洗脱组分,其中DPPH自由基清除活性最高组分为凝胶过滤酶解抗氧化肽,冻干得抗氧化肽。6.如权利要求3所述的制备方法,其特征在于,所述姜黄提取物通过以下步骤制得:(1)姜黄块根粉碎后过50目筛,制得姜黄粉;(2)将上述姜黄粉与60~85%乙醇以质量体积比1:5~10混合均匀,旋转提取2小时,离心或者过滤,取清液,得姜黄提取液,将该姜黄提取液浓缩20~25倍,得姜黄提取浓缩液;(4)按照药液辅料比1:4~8,向上述浓缩液中加入糊精或玉米淀粉,混合均匀;(5)65~80℃烘干10~12小时,得干燥产物;(6)上述干燥产物粉碎,过100目筛,得姜黄提取物干粉制剂。7.一种如权利要求1所述的水产品天然生物保鲜剂在水产品保鲜中的应用,其特征在于,新鲜水产品预处理后喷洒或浸泡于上述保鲜剂中,密封包装后置于1~4℃保藏。8.如权利要求7所述的应用,其特征在于,所述的水产品为鱼类,应用上述保鲜剂对鱼类进行处理时包括以下步骤:新鲜鱼类去除内脏,洗净沥干,将上述保鲜剂均匀地喷洒于鱼体表面,接着将其进行真空气调包装,最后将包装后的鱼类冷藏,冷藏温度为1~4℃。9.如权利要求7所述的应用,其特征在于,所述的水产品为虾类,应用上述保鲜剂对虾类进行处理时包括以下步骤:将鲜活虾类用冰水猝死,接着将其浸泡于浓度为20~30%的保鲜剂溶液中50~60min,将虾类从保鲜剂溶液中捞出沥干,密封保藏后置于4℃保藏。

说明书

技术领域

太阳城集团本发明涉及水产品保鲜技术领域,尤其涉及一种水产品天然生物保鲜剂及其制备方法和应用。

背景技术

太阳城集团水产品由于味道鲜美、营养丰富,富含对心血管病具有疗效的n~3不饱和脂肪酸和其他活性物质,因此越来越受到人们的喜欢。由于鱼虾等水产品的肌肉中水分含量约70%,组织脆弱、天然免疫物质少、不饱和脂肪酸易氧化及可溶性蛋白质含量高,因此比一般的动物肉组织不易贮藏,容易降低品质,甚至腐败。

太阳城集团保鲜剂处理是水产品储运处理中的常用手段,它不仅能有效减缓水产品鲜度下降,并且能增加水产品的持水性,防止在储运过程中变色。目前,常用的水产品保鲜剂一般为化学保鲜剂,如专利号为ZL200710066793.7(授权太阳城集团号为CN 101002579B)的中国发明专利《虾类保鲜剂及其应用》公开了一种虾类保鲜剂,该保鲜剂以亚硫酸盐类结合一定量的分散剂制成,虽然解决了虾类保鲜冰中保鲜剂(包括亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、焦亚硫酸盐、低亚硫酸盐)分布不均匀的问题,但亚硫酸盐有毒性,不仅影响食用者的身体健康,而且也会使得使用该种化学保鲜剂的虾类产品不符合一些西方国家的食品安全规定,从而给生产企业带来经济损失。

生物保鲜剂是近几年兴起的一种新型保鲜剂,一般从动植物、微生物中提取或利用现代生物工程技术得到,其以安全、健康等特点受到人们的关注。如申请号为201410639965.5(申请公布号为CN 104322648 A)的中国发明专利《一种冰保鲜鲳鱼的方法》公开了一种茶多酚生物保鲜剂;申请号为200910234813.6(申请公布号为CN102038270 A)的中国发明专利《贝类生物保鲜剂》公开了一种贝类生物保鲜剂,该生物保鲜剂由丙氨酸、溶菌酶、甘氨酸、抗坏血酸、磷酸镁组成。

现有的生物保鲜剂与传统水产品保鲜剂相比,安全性显著提高,但大多数的生物保鲜剂的保鲜效果不理想,还有待进一步提高。

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是针对现有技术而提供一种保鲜效果好的水产品天然生物保鲜剂。

本发明所要解决的第二个技术问题是针对现有技术而提供一种上述水产品天然生物保鲜剂的制备方法。

本发明所要解决的第三个技术问题是针对现有技术而提供一种上述水产品天然生物保鲜剂在水产品保鲜中的应用。

太阳城集团本发明解决上述第一技术问题所采用的技术方案为:一种水产品天然生物保鲜剂,其特征在于,按重量份数计由以下成分组成:硫酸软骨素寡糖16~24份,抗氧化肽35~40份,姜黄提取物41~45份,除菌水300~450份。

上述方案中的硫酸软骨素寡糖具有较强的抗氧化活性,能够保护机体细胞膜免受氧化损伤,同时也能防止水产品中脂肪的氧化;抗氧化肽能够抑制空气中的氧气导致的水产品脂肪氧化和变色,能够保持食品的良好风味和鲜亮的色泽;姜黄乙醇提取物中含有姜黄素、姜黄酮、龙脑、姜黄烯、石竹烯等多种活性成分,这些成分具有很好地抑菌和抗氧化作用,能够显著抑制大肠杆菌、鳗弧菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌和霉菌等多种水产品中常见菌的生长和增殖,同时姜黄提取物中的姜黄素、姜黄酮均是良好的天然抗氧化成分,与上述硫酸软骨素寡糖和抗氧化肽配合作用,能够抑制氧气、自由基等对脂肪、蛋白质、DNA和色素的氧化损伤。

作为优选,所述硫酸软骨素寡糖以水产品加工中产生的骨质副产物为原料制得,降低生产成本,环保、经济。

本发明解决第二个技术问题所采用的技术方案为:上述水产品天然生物保鲜剂的制备方法,包括以下步骤:分别制备上述硫酸软骨素寡糖、抗氧化肽以及姜黄提取物,按上述质量份数将硫酸软骨素寡糖、抗氧化肽以及姜黄提取物混合,加入除菌水,搅拌均匀得所需的水产品天然生物保鲜剂。

太阳城集团作为优选,所述硫酸软骨素寡糖通过以下步骤制得:

(1)以金枪鱼骨、鱿鱼喉骨为原料,煮沸后剔除残留的肌肉、脂肪和其他结缔组织,捣碎匀浆后得匀浆液;

(2)按照体积比1:1~2在上述匀浆液中加入丙酮,搅拌脱脂2~3h,静置,弃去丙酮层,得脱脂固形物;

(3)按固液比1:1~3g/mL向上述脱脂固形物中加入0.5mol/L磷酸盐缓冲液,调节pH为5.0~7.0,搅拌均匀,得混合物;

(4)将上述混合物升温至50~60℃,加入菠萝蛋白酶,加酶量为1000~2000U/g,酶解太阳城集团为6~10h,升温至75℃处理10分钟灭酶,得第一次酶解液;

(5)调节上述第一次酶解液的pH为8.0~9.0,加入碱性蛋白酶,加酶量为1500~3000U/g,酶解温度为50~55℃,搅拌酶解3~6h,升温至75℃处理10min得第二次酶解液;

(6)将上述第二次酶解液4000~5000rpm离心10min,取上清液;

(7)在上述上清液中加入体积分数60~90%的乙醇,pH6.0~8.5条件下,沉淀获得硫酸软骨素;

(8)按料液比1:20~25g/mL向上述硫酸软骨素中加入上0.4mol/L盐酸溶液,65~80℃水浴搅拌酸解18~24h;冷却至室温,加入氢氧化钠中和,冷冻干燥,得硫酸软骨素寡糖。

太阳城集团作为优选,所述抗氧化肽通过以下步骤制得:

太阳城集团(1)取洗净后的金枪鱼、鱿鱼加工副产物,组织捣碎匀浆后的匀浆液,备用;

(2)按照料液比1:6~9g/mL向上述匀浆液中加入异丙醇,于35~40℃下搅拌脱脂24~48h,然后5000~8000rpm离心15min,弃去上清,收集脱脂固形物沉淀;

太阳城集团(3)按固液比1:3~5g/mL向上述脱脂固形物中加入0.5mol/L磷酸盐缓冲液,调节pH为5.0~7.0,搅拌均匀,得混合物。

(4)上述混合物搅拌升温至50~60℃,加入风味蛋白酶,加酶量为1000~2000U/g,50~60℃酶解3~6h,得到酶解产物;将上述酶解产物升温至75℃以上,并保持10~15min,灭酶,冷却至室温,于5000rpm离心10min,得到酶解液,冻干得酶解物干粉;

(5)将上述酶解物干粉溶于pH 6.5~7.5的磷酸盐缓冲液,配成20~25mg/mL的溶液,于0.1~0.15MPa的工作压力和20~25℃的温度下,分别采用截留分子量7kDa、5kDa、3kDa和1kDa的超滤膜对所得酶解产物进行超滤处理,收集各组分,通过测定各组分对DPPH自由基的清除能力,确定各组分的抗氧化能力,收集抗氧化能力最强的组分并制得干粉;

(6)将上述抗氧化能力最强的组分用pH 6.5~7.5的磷酸盐缓冲液配成20~25mg/mL的溶液,经葡聚糖凝胶G-25柱层析分离,用pH6.5~7.5磷酸盐缓冲液进行洗脱,根据220nm下的吸光度曲线收集洗脱组分,其中DPPH自由基清除活性最高组分为凝胶过滤酶解抗氧化肽,冻干得抗氧化肽。

作为优选,所述姜黄提取物通过以下步骤制得:

太阳城集团(1)姜黄块根粉碎后过40~50目筛,制得姜黄粉;

(2)将上述姜黄粉与60~85%乙醇以质量体积比1:5~10混合均匀,旋转提取2小时,离心或者过滤,取清液,得姜黄提取液,将该姜黄提取液浓缩20~25倍,得姜黄提取浓缩液;

(4)按照药液辅料比1:4~8,向上述浓缩液中加入糊精或玉米淀粉,混合均匀;

太阳城集团(5)65~80℃烘干10~12h,得干燥产物;

(6)将上述干燥产物粉碎,过100目筛,得姜黄提取物干粉制剂。

本发明技术第三个技术问题所采用的技术方案为:上述水产品天然生物保鲜剂在水产品保鲜中的应用:新鲜水产品预处理后喷洒或浸泡于上述保鲜剂中,密封包装后置于1~4℃保藏。

作为优选,所述的水产品为鱼类,应用上述保鲜剂对鱼类进行处理时包括以下步骤:新鲜鱼类去除内脏,洗净沥干,将上述保鲜剂均匀地喷洒于鱼体表面,接着将其进行真空气调包装,最后将包装后的鱼类冷藏,冷藏温度为1~4℃。如此处理,可使鱼肉保持较好的新鲜度和口感。

太阳城集团进一步,作为优选,所述的水产品为虾类,应用上述保鲜剂对虾类进行处理时包括以下步骤:将鲜活虾类用冰水猝死,接着将其浸泡于浓度为20~30%的保鲜剂溶液中50~60min,将虾类从保鲜剂溶液中捞出沥干,密封保藏后置于4℃保藏。如此处理,可有效避免虾体黑变、腐败变质,保持虾体的新鲜度。

与现有技术相比,本发明的优点在于:本发明中的生物保鲜剂无毒、无残留、低成本,选用硫酸软骨素寡糖、抗氧化肽和姜黄提取物三种物质进行合理组配,使三者的生物活性有机结合,充分利用他们的抗氧化活性,可有效避免水产品脂肪、蛋白质等不被氧化破坏,并保持水产品鲜亮的色泽;同时,充分利用姜黄提取物的广谱抗菌活性,防止各种水产品常见菌在水产品中保藏过程中的滋生和繁殖,从而对水产品起到有效的保鲜作用,显著延长水产品的保鲜期。此外,该保鲜剂的制备过程中,硫酸软骨素寡糖和抗氧化肽均以水产品加工副产物为原料,可降低生产成本,提升水产品加工的产值,改善环境,具有显著的社会效益。

具体实施方式

太阳城集团以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。

太阳城集团实施例1:水产品天然生物保鲜剂的制备

本实施例中的水产品天然生物保鲜剂通过以下步骤制备:

1、硫酸软骨素寡糖的制备

(1)以金枪鱼骨、鱿鱼喉骨为原料,将该原料煮沸1h,然后剔除残留的肌肉、脂肪和其他结缔组织,用高速组织捣碎机匀浆,得匀浆液;

太阳城集团(2)按照体积比1:1在上述匀浆液中加入丙酮,150rpm搅拌脱脂2h,静置,弃去丙酮层,得脱脂固形物;

太阳城集团(3)按固液比1:1g/mL向上述脱脂固形物中加入0.5mol/L磷酸盐缓冲液,调节pH为5.0,搅拌均匀,得混合物;

太阳城集团(4)将上述混合物升温至50℃,加入菠萝蛋白酶,加酶量为1000U/g,酶解太阳城集团为6h,升温至75℃处理10分钟灭酶,得第一次酶解液;

(5)调节上述第一次酶解液的pH为8.0,加入碱性蛋白酶,加酶量为1500U/g,酶解温度为50℃,搅拌酶解3h,升温至75℃处理10分钟灭酶,得第二次酶解液;

(6)将上述第二次酶解液4000rpm离心10min,取上清液;

太阳城集团(7)在上述上清液中加入体积分数60%的乙醇,pH6.0条件下,沉淀获得硫酸软骨素;

(8)按料液比1:20g/mL向上述硫酸软骨素中加入浓度0.4mol/L盐酸溶液,65℃水浴搅拌酸解24h;冷却至室温,加入氢氧化钠中和,冷冻干燥,得硫酸软骨素寡糖。

2、抗氧化肽的制备

太阳城集团(1)取洗净后的金枪鱼、鱿鱼加工副产物(鱼皮、碎肉以及鱼头),用高速组织捣碎机匀浆,得匀浆液,备用;

太阳城集团(2)按照料液比1:9g/mL向上述匀浆液中加入异丙醇,于40℃下搅拌脱脂24h,然后5000rpm离心15min,弃去上清,收集脱脂固形物沉淀;

太阳城集团(3)按固液比1:3g/mL向上述脱脂固形物中加入0.5mol/L磷酸盐缓冲液,调节pH为5.0,搅拌均匀,得混合物;

(4)上述混合物搅拌升温至60℃,加入风味蛋白酶,加酶量为1000U/g,60℃酶解3h,得到酶解产物;将上述酶解产物升温至75℃以上,并保持10~15min,灭酶,冷却至室温,于5000rpm离心10min,得到酶解液,冻干得酶解物干粉;

(5)将上述酶解物干粉溶于pH 6.5~7.5的磷酸盐缓冲液,配成20mg/mL的溶液,于0.1~0.15MPa的工作压力和20~25℃的温度下,分别采用截留分子量7kDa、5kDa、3kDa和1kDa的超滤膜对所得酶解产物进行超滤处理,收集各组分,通过测定各组分对DPPH自由基的清除能力,确定各组分的抗氧化能力,收集抗氧化能力最强的组分并制得干粉;本实施例中,分子量小于1kDa的肽类组分抗氧化能力最强;

(6)将上述分子量小于1kDa的超滤酶解物干粉用pH 6.5~7.5的磷酸盐缓冲液配成20mg/mL的溶液,经过葡聚糖凝胶G-25柱层析分离,用pH 6.5~7.5磷酸盐缓冲液进行洗脱,根据220nm下的吸光度曲线收集洗脱组分,其中DPPH自由基清除活性最高组分为凝胶过滤酶解抗氧化肽,冻干得抗氧化肽。

3、姜黄提取物的制备

(1)姜黄块根粉碎后过50目筛,制得姜黄粉;

(2)将上述姜黄粉与60%乙醇以质量体积比1:5混合均匀,100rpm旋转提取2小时,3000rpm离心10min,重复提取3次,取清液,得姜黄提取液,将该姜黄提取液浓缩20倍,得姜黄提取浓缩液;

(4)按照药液辅料比1:4,向上述浓缩液中加入糊精或玉米淀粉,混合均匀;

(5)65℃烘干12小时,得干燥产物;

(6)上述干燥产物粉碎,过100目筛,得姜黄提取物干粉制剂。

4、取16份上述制备的硫酸软骨素寡糖、40份上述制备的抗氧化肽、44份上述姜黄提取物,混合均匀,加入300份除菌水,得所需的水产品天然生物保鲜剂。

太阳城集团实施例2:水产品天然生物保鲜剂的制备

太阳城集团本实施例中的水产品天然生物保鲜剂通过以下步骤制备:

太阳城集团1、硫酸软骨素寡糖的制备

(1)以金枪鱼骨、鱿鱼喉骨为原料,将该原料煮沸1h,然后剔除残留的肌肉、脂肪和其他结缔组织,用高速组织捣碎机匀浆,得匀浆液;

(2)按照体积比1:2在上述匀浆液中加入丙酮,150rpm搅拌脱脂3h,静置,弃去丙酮层,得脱脂固形物;

太阳城集团(3)按固液比1:2g/mL向上述脱脂固形物中加入0.5mol/L磷酸盐缓冲液,调节pH为6.0,搅拌均匀,得混合物;

太阳城集团(4)将上述混合物升温至60℃,加入菠萝蛋白酶,加酶量为1500U/g,酶解太阳城集团为8h,升温至75℃处理10min灭酶,得第一次酶解液;

太阳城集团(5)调节上述第一次酶解液的pH为9.0,加入碱性蛋白酶,加酶量为2100U/g,酶解温度为55℃,搅拌酶解4h,升温至75℃处理10分钟灭酶,得第二次酶解液;

太阳城集团(6)将上述第二次酶解液5000rpm离心10min,取上清液;

太阳城集团(7)在上述上清液中加入体积分数75%的乙醇,pH8.5条件下,沉淀获得硫酸软骨素;

太阳城集团(8)按料液比1:25g/mL向上述硫酸软骨素中加入浓度为0.4mol/L盐酸溶液,80℃水浴搅拌酸解21h;冷却至室温,加入氢氧化钠中和,冷冻干燥,得硫酸软骨素寡糖。

太阳城集团2、抗氧化肽的制备

(1)取洗净后的金枪鱼、鱿鱼加工副产物(鱼皮、碎肉以及鱼头),用高速组织捣碎机匀浆,得匀浆液,备用;

(2)按照料液比1:8g/mL向上述匀浆液中加入异丙醇,于35℃下搅拌脱脂48h,然后8000rpm离心15min,弃去上清,收集脱脂固形物沉淀;

(3)按固液比1:5g/mL向上述脱脂固形物中加入0.5mol/L磷酸盐缓冲液,调节pH为6.0,搅拌均匀,得混合物。

(4)上述混合物搅拌升温至50℃,加入风味蛋白酶,加酶量为1500U/g,50℃酶解6h,得到酶解产物;将上述酶解产物升温至75℃以上,并保持10~15min,灭酶,冷却至室温,于5000rpm离心10min,得到酶解液,冻干得酶解物干粉;

(5)将上述酶解物干粉溶于pH 6.5~7.5的磷酸盐缓冲液,配成25mg/mL的溶液,于0.1~0.15MPa的工作压力和20~25℃的温度下,分别采用截留分子量7kDa、5kDa、3kDa和1kDa的超滤膜对所得酶解产物进行超滤处理,收集各组分,通过测定各组分对DPPH自由基的清除能力,确定各组分的抗氧化能力,收集抗氧化能力最强的组分并制得干粉;本实施例中,分子量小于1kDa的肽类组分抗氧化能力最强;

太阳城集团(6)将上述分子量小于1kDa的超滤酶解物干粉用pH 6.5~7.5的磷酸盐缓冲液配成25mg/mL的溶液,经过葡聚糖凝胶G-25柱层析分离,用pH 6.5~7.5磷酸盐缓冲液进行洗脱,根据220nm下的吸光度曲线收集洗脱组分,其中,DPPH自由基清除活性最高组分为凝胶过滤酶解抗氧化肽,冻干得抗氧化肽。

3、姜黄提取物的制备

(1)姜黄块根粉碎后过40目筛,制得姜黄粉;

(2)将上述姜黄粉与60~85%乙醇以质量体积比1:10混合均匀,200rpm旋转提取2小时,过滤,重复提取3次,取清液,得姜黄提取液,将该姜黄提取液浓缩20~25倍,得姜黄提取浓缩液;

(4)按照药液辅料比1:6,向上述浓缩液中加入糊精或玉米淀粉,混合均匀;

太阳城集团(5)80℃烘干10小时,得干燥产物;

太阳城集团(6)上述干燥产物粉碎,过100目筛,得姜黄提取物干粉制剂。

4、取18份上述制备的硫酸软骨素寡糖、37份上述制备的抗氧化肽、43份上述姜黄提取物,混合均匀,加入350份除菌水,搅拌均匀,得所需的水产品天然生物保鲜剂。

太阳城集团实施例3:水产品天然生物保鲜剂的制备

本实施例中的水产品天然生物保鲜剂通过以下步骤制备:

1、硫酸软骨素寡糖的制备

(1)以金枪鱼骨、鱿鱼喉骨为原料,将该原料煮沸1h,然后剔除残留的肌肉、脂肪和其他结缔组织,用高速组织捣碎机匀浆,得匀浆液;

太阳城集团(2)按照体积比1:1在上述匀浆液中加入丙酮,150rpm搅拌脱脂2h,静置,弃去丙酮层,得脱脂固形物;

(3)按固液比1:3g/mL向上述脱脂固形物中加入0.5mol/L磷酸盐缓冲液,调节pH为7.0,搅拌均匀,得混合物;

(4)将上述混合物升温至50℃,加入菠萝蛋白酶,加酶量为2000U/g,酶解太阳城集团为10h,升温至75℃处理10分钟灭酶,得第一次酶解液;

(5)调节上述第一次酶解液的pH为8.0,加入碱性蛋白酶,加酶量为3000U/g,酶解温度为50℃,搅拌酶解6h,升温至75℃处理10分钟灭酶,得第二次酶解液;

(6)将上述第二次酶解液4000rpm离心10min,取上清液;

太阳城集团(7)在上述上清液中加入体积分数90%的乙醇,pH7.0条件下,沉淀获得硫酸软骨素;

太阳城集团(8)按料液比1:23g/mL向上述硫酸软骨素中加入上0.4mol/L盐酸溶液,65~80℃水浴搅拌酸解24h;冷却至室温,加入氢氧化钠中和,冷冻干燥,得硫酸软骨素寡糖。

太阳城集团2、抗氧化肽的制备

太阳城集团(1)取洗净后的金枪鱼、鱿鱼加工副产物(鱼皮、碎肉以及鱼头),用高速组织捣碎机匀浆,得匀浆液,备用;

太阳城集团(2)按照料液比1:9g/mL向上述匀浆液中加入异丙醇,于40℃下搅拌脱脂36h,然后7000rpm离心15min,弃去上清,收集脱脂固形物沉淀;

(3)按固液比1:4g/mL向上述脱脂固形物中加入0.5mol/L磷酸盐缓冲液,调节pH为7.0,搅拌均匀,得混合物。

(4)上述混合物搅拌升温至60℃,加入风味蛋白酶,加酶量为2000U/g,55℃酶解4.5h,得到酶解产物;将上述酶解产物升温至75℃以上,并保持10~15min,灭酶,冷却至室温,于5000rpm离心10min,得到酶解液,冻干得酶解物干粉;

(5)将上述酶解物干粉溶于pH 6.5~7.5的磷酸盐缓冲液,配成20~25mg/mL的溶液,于0.1~0.15MPa的工作压力和20~25℃的温度下,分别采用截留分子量7kDa、5kDa、3kDa和1kDa的超滤膜对所得酶解产物进行超滤处理,收集各组分,通过测定各组分对DPPH自由基的清除能力,确定各组分的抗氧化能力,收集抗氧化能力最强的组分并制得干粉;本实施例中,分子量小于1kDa的肽类组分抗氧化能力最强;

(6)将上述分子量小于1kDa的超滤酶解物干粉用pH 6.5~7.5的磷酸盐缓冲液配成25mg/mL的溶液,经过葡聚糖凝胶G-25柱层析分离,用pH 6.5~7.5磷酸盐缓冲液进行洗脱,根据220nm下的吸光度曲线收集洗脱组分,其中,DPPH自由基清除活性最高组分为凝胶过滤酶解抗氧化肽,冻干得抗氧化肽。

太阳城集团3、姜黄提取物的制备

(1)姜黄块根粉碎后过50目筛,制得姜黄粉;

(2)将上述姜黄粉与60~85%乙醇以质量体积比1:7混合均匀,150rpm旋转提取2小时,3000rpm离心10min,重复提取3次,取清液,得姜黄提取液,将该姜黄提取液浓缩20~25倍,得姜黄提取浓缩液;

(4)按照药液辅料比1:8,向上述浓缩液中加入糊精或玉米淀粉,混合均匀;

太阳城集团(5)70℃烘干11小时,得干燥产物;

(6)上述干燥产物粉碎,过100目筛,得姜黄提取物干粉制剂。

4、取20份上述制备的硫酸软骨素寡糖、35份上述制备的抗氧化肽、45份上述姜黄提取物,混合均匀,加入400份除菌水,搅拌均匀,得所需的水产品天然生物保鲜剂。

太阳城集团实施例4:水产品天然生物保鲜剂的制备

与实施例1不同的是,实施例4中,取24份上述制备的硫酸软骨素寡糖、35份上述制备的抗氧化肽、41份上述姜黄提取物,混合均匀,加入450份除菌水,搅拌均匀,得所需的水产品天然生物保鲜剂。

实施例5:对大黄鱼的保鲜处理实验

太阳城集团实验组:取实施例1~实施例4中制备的生物保鲜剂进行大黄鱼的保鲜处理:将新鲜大黄鱼去除内脏,清洗干净,沥干后将该生物保鲜剂均匀喷洒于大黄鱼体和鱼肉表面,然后包装入袋。包装入袋后,用气调包装机抽真空、充气和热封口进行气调包装。将包装好的大黄鱼进行冷藏,冷藏温度为1~4℃。

太阳城集团对照组:与实验组不同的是,对照组采用市售的常规水产品保鲜剂对大黄鱼进行处理,其他处理方式与实验组相同。处理60天后,将实验组和对比组中的大黄鱼进行检验,检验结果如表2、表3所示。

(1)感官评价效果检验

表1鱼肉感官评定评分标准

太阳城集团表2大黄鱼感官评定结果

检验项目 实施例1 实施例2 实施例3 实施例4 对照组 气味 5 4 4 4 3 色泽 5 5 4 5 2 质地 5 5 5 5 2

太阳城集团由表2可知,本发明的水产品生物保鲜剂能够显著提高大黄鱼的保鲜效果,保证了大黄鱼的气味、色泽和质地,延长保鲜期。

(2)菌落总数的测定

太阳城集团测定方法参考GB/T4789.2-2010操作,无菌条件下取25g大黄鱼鱼肉,放于225ml含玻璃珠的无菌生理盐水中,充分混匀,制成1:10的稀释液,根据样品腐败程度,选择合适稀释度,每个稀释度做三次平行,采用倒平板法测定菌落总数,4个实施例的菌落总数测定结果分别为8.67×104CFU/g、1.19×105CFU/g、9.45×104CFU/g,对照组的平均测定结果为3.17×105CFU/g。可见,本发明中的水产品生物保鲜剂具有良好的抗菌性,能够显著抑制大黄鱼保鲜过程中细菌的增殖。

太阳城集团(3)挥发性盐基氮(TVB-N)的测定

将鱼去鳞、去皮沿背脊取肌肉部分,组织捣碎机捣碎,按照国标GB/T 5009.44-2003,测定肉中TVB-N的含量,结果参见表3。

表3生物保鲜剂对大黄鱼挥发性盐基氮含量的影响

由表4可见,采用本发明的生物保鲜剂的实验组中(实施例1至实施例4),挥发性盐基氮的含量均比对照组显著下降,表明本发明中的生物保鲜剂能够显著延长大黄鱼的保鲜期。

实施例6:对南美白对虾的保鲜处理实验

太阳城集团实验组:取实施例1~实施例4中制备的生物保鲜剂进行南美白对虾的保鲜处理:将鲜活南美白对虾放入冰水中猝死,接着将对虾浸泡在配制好的20%保鲜剂中60min,沥干后用聚乙烯食品袋包装密封后置于4℃冰箱中。

对照组:与实验组不同的是,对照组采用市售的常规水产品保鲜剂对南美白对虾进行处理,其他处理方式与实验组相同。处理10天后,将实验组和对比组中的南美白对虾进行检验,检验结果如表4、表5所示。

(1)菌落总数的测定

参考GB/T4789.2-2010进行操作,测定对虾的菌落总数,结果如表4所述。

表4保鲜剂对南美白对虾菌落总数的影响(CFU/g)

3d 5d 7d 10d 对照组 6.01×104 7.12×105 6.71×106 4.03×107 实施例1 2.14×104 9.87×104 5.67×105 6.45×106 实施例2 3.01×104 1.24×105 8.79×105 8.61×106 实施例3 1.22×104 1.02×105 7.99×105 7.32×106 实施例4 2.01×104 9.49×104 6.47×105 6.12×106

(2)挥发性盐基氮(TVB-N)的测定

太阳城集团对虾去头、去壳取肌肉切碎,按照国标GB/T 5009.44-2003测定虾肉中TVB-N的含量。

太阳城集团表5生物保鲜剂对南美白对虾肉中挥发性盐基氮含量的影响

由表4和表5可见,本发明生物保鲜剂能够显著抑制南美白对虾菌落总数的增长,同时也显著抑制了虾肉中挥发性盐基氮的产生,具有显著的保鲜效果。

综上可见,本发明中的水产品天然生物保鲜剂保鲜效果较好,具有显著的抗氧化活性和抗菌性,可有效避免水产品脂肪、蛋白质等不被氧化破坏,并保持水产品鲜亮的色泽,能有效防止各种水产品常见菌在水产品中保藏过程中的滋生和繁殖,从而对水产品起到有效的保鲜作用,显著延长水产品的保鲜期。

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