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一种酶法制备山核桃蛋白的方法.pdf

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一种 法制 山核桃 蛋白 方法
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摘要
申请专利号:

CN201610152003.6

申请日:

20160317

公开号:

CN105767455A

公开日:

20160720

当前法律状态:

有效性:

审查中

法律详情:
IPC分类号: A23J3/14,A23J3/34 主分类号: A23J3/14,A23J3/34
申请人: 武汉轻工大学,重庆市九重山实业有限公司
发明人: 何东平,蔡春茂,胡传荣,刘零怡,张四红,乔雪
地址: 430023 湖北省武汉市汉口常青花园学府南路68号(武汉轻工大学)
优先权: CN201610152003A
专利代理机构: 常州市科谊专利代理事务所 代理人: 袁兴隆
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法律状态
申请(专利)号:

CN201610152003.6

授权太阳城集团号:

法律状态太阳城集团日:

法律状态类型:

摘要

本发明公开了一种酶法制备山核桃蛋白的方法,包括如下步骤:将山核桃粉原料和水混匀制得一次浆液,调节一次浆液pH,并加入一次复合酶酶解,得到一次酶解液,对一次酶解液进行微波处理,得到微波酶解液;将微波酶解液进行一次碱提,得到一次蛋白液和残渣沉淀;将残渣沉淀和水混匀制得二次浆液,调节二次浆液pH,加入二次复合酶酶解,并在酶解过程中进行超声振荡处理,得到二次酶解液;将二次酶解液进行二次碱提,得到二次蛋白液;将一次蛋白液和二次蛋白液混匀,调节pH后进行酸沉处理得到蛋白粉;将蛋白粉进行冷冻干燥处理,即得山核桃蛋白。本发明提供的酶法制备山核桃蛋白的方法,工艺安全、制备便捷、山核桃蛋白提取率高。

权利要求书

1.一种酶法制备山核桃蛋白的方法,其特征在于,包括如下步骤:步骤一、山核桃粉原料的制备;步骤二、一次酶解:将山核桃粉原料和水混匀制得一次浆液,调节一次浆液pH,并加入一次复合酶酶解,待酶解反应结束进行灭酶处理,得到一次酶解液,并对一次酶解液进行微波处理,得到微波酶解液;步骤三、一次提取:将微波酶解液进行一次碱提,得到一次碱提液,并将其离心分离得到一次蛋白液和残渣沉淀;步骤四、二次酶解:将残渣沉淀和水混匀制得二次浆液,调节二次浆液pH,加入二次复合酶酶解,并在酶解过程中进行超声振荡处理,待酶解反应结束进行灭酶处理,得到二次酶解液;步骤五、二次提取:将二次酶解液进行二次碱提,得到二次碱提液,并将其离心分离得到二次蛋白液;步骤六、酸沉:将一次蛋白液和二次蛋白液混匀,调节pH后进行酸沉处理,离心分离得到蛋白粉;步骤七、冷冻干燥:将蛋白粉进行冷冻干燥处理,即得山核桃蛋白。2.如权利要求1所述的酶法制备山核桃蛋白的方法,其特征在于,所述步骤一中山核桃粉原料的制备过程为:将山核桃去壳后采用六号溶剂浸泡,脱溶后得到脱脂的山核桃粕,其残油量为1.4~2.0%,并将脱脂的山核桃粕粉碎过筛得到颗粒大小为100~150目筛的山核桃粉原料。3.如权利要求1所述的酶法制备山核桃蛋白的方法,其特征在于,所述步骤二中一次酶解的过程如下:将山核桃粉原料和水按料液比1g:15~25mL混匀制得一次浆液,在一次浆液中加入盐酸或柠檬酸将一次浆液pH调至3~5,并加入一次复合酶酶解,酶解反应温度为50~60℃,酶解反应太阳城集团为4~8小时,待酶解反应结束,升温至80~90℃灭酶10~20分钟,得到一次酶解液,并对一次酶解液进行微波处理,微波功率为250~500W,微波太阳城集团为15~25分钟,得到微波酶解液。4.如权利要求3所述的酶法制备山核桃蛋白的方法,其特征在于,所述步骤二中的一次复合酶采用半纤维素酶+原果胶酶+果胶甲酯水解酶+果胶酸酶,所述半纤维素酶、原果胶酶、果胶甲酯水解酶和果胶酸酶的用量为1:3~6:2~4:4~8,且一次复合酶的加酶量为山核桃粉原料用量的1000~2000u/g。5.如权利要求1所述的酶法制备山核桃蛋白的方法,其特征在于,所述步骤三中一次提取的条件为:碱提料液比1g:15~25mL,碱提pH9~12,碱提温度45~55℃,碱提太阳城集团2~4h。6.如权利要求1所述的酶法制备山核桃蛋白的方法,其特征在于,所述步骤四中二次酶解的过程如下:将残渣沉淀和水按1g:4~8mL混匀制得二次浆液,在二次浆液中加入盐酸或柠檬酸将二次浆液pH调至4~5,加入二次复合酶酶解,酶解反应温度为45~55℃,酶解反应太阳城集团为2~5小时,并在酶解过程中进行超声振荡处理,超声频率为2KHz,超声功率为400~800W,待酶解反应结束,升温至80~90℃灭酶10~20分钟,得到二次酶解液。7.如权利要求6所述的酶法制备山核桃蛋白的方法,其特征在于,所述步骤四中的二次复合酶采用半纤维素酶+糖化酶,所述半纤维素酶和糖化酶的用量为1:2~4,且二次复合酶的加酶量为山核桃粉原料用量的2000~3000u/g。8.如权利要求1所述的酶法制备山核桃蛋白的方法,其特征在于,所述步骤五中二次提取的条件为:碱提料液比1g:5~10mL,碱提pH9~12,碱提温度45~55℃,碱提太阳城集团1~3h。9.如权利要求1所述的酶法制备山核桃蛋白的方法,其特征在于,所述步骤六中酸沉过程为:将一次蛋白液和二次蛋白液混匀,加入盐酸或柠檬酸调节pH至4.5进行酸沉,酸沉温度为20~30℃,待出现絮状物后离心分离得到蛋白粉。

说明书

技术领域

本发明涉及山核桃蛋白技术领域,具体涉及一种酶法制备山核桃蛋白的方法。

背景技术

核桃又名胡桃、羌桃,属胡桃科胡桃属植物,是一种营养价值和经济价值都很高的珍贵果木;核桃油,核桃仁含有18%~24%的蛋白质,12%~16%的碳水化合物,1.5%~2.0%的纤维素,1.7%~2.0%的矿物质,由此可见,山核桃的加工应主要以山核桃油和山核桃蛋白为主。山核桃蛋白作为一种新的植物蛋白资源,其效价与动物蛋百相近,氨基酸种类齐全,其中包含多种人体必需氨基酸,尤其是精氨酸、谷氨酸、组氨酸、络氨酸等含量高,8种氨基酸含量比例合理,接近联合国粮农组织和世界卫生组织规定的标准氨基酸配比,具有很高的食用价值和保健功能。因此,有必要研究一种制备山核桃蛋白的方法。

发明内容

针对上述技术中存在的不足之处,本发明提供了一种工艺安全、制备便捷、山核桃蛋白提取率高的酶法制备山核桃蛋白的方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:一种酶法制备山核桃蛋白的方法,包括如下步骤:步骤一、山核桃粉原料的制备;步骤二、一次酶解:将山核桃粉原料和水混匀制得一次浆液,调节一次浆液pH,并加入一次复合酶酶解,待酶解反应结束进行灭酶处理,得到一次酶解液,并对一次酶解液进行微波处理,得到微波酶解液;步骤三、一次提取:将微波酶解液进行一次碱提,得到一次碱提液,并将其离心分离得到一次蛋白液和残渣沉淀;步骤四、二次酶解:将残渣沉淀和水混匀制得二次浆液,调节二次浆液pH,加入二次复合酶酶解,并在酶解过程中进行超声振荡处理,待酶解反应结束进行灭酶处理,得到二次酶解液;步骤五、二次提取:将二次酶解液进行二次碱提,得到二次碱提液,并将其离心分离得到二次蛋白液;步骤六、酸沉:将一次蛋白液和二次蛋白液混匀,调节pH后进行酸沉处理,离心分离得到蛋白粉;步骤七、冷冻干燥:将蛋白粉进行冷冻干燥处理,即得山核桃蛋白。

优选的,所述步骤一中山核桃粉原料的制备过程为:将山核桃去壳后采用六号溶剂浸泡,脱溶后得到脱脂的山核桃粕,其残油量为1.4~2.0%,并将脱脂的山核桃粕粉碎过筛得到颗粒大小为100~150目筛的山核桃粉原料。

优选的,所述步骤二中一次酶解的过程如下:将山核桃粉原料和水按料液比1g:15~25mL混匀制得一次浆液,在一次浆液中加入盐酸或柠檬酸将一次浆液pH调至3~5,并加入一次复合酶酶解,酶解反应温度为50~60℃,酶解反应太阳城集团为4~8小时,待酶解反应结束,升温至80~90℃灭酶10~20分钟,得到一次酶解液,并对一次酶解液进行微波处理,微波功率为250~500W,微波太阳城集团为15~25分钟,得到微波酶解液。

优选的,所述步骤二中的一次复合酶采用半纤维素酶+原果胶酶+果胶甲酯水解酶+果胶酸酶,所述半纤维素酶、原果胶酶、果胶甲酯水解酶和果胶酸酶的用量为1:3~6:2~4:4~8,且一次复合酶的加酶量为山核桃粉原料用量的1000~2000u/g。

优选的,所述步骤三中一次提取的条件为:碱提料液比1g:15~25mL,碱提pH9~12,碱提温度45~55℃,碱提太阳城集团2~4h。

优选的,所述步骤四中二次酶解的过程如下:将残渣沉淀和水按1g:4~8mL混匀制得二次浆液,在二次浆液中加入盐酸或柠檬酸将二次浆液pH调至4~5,加入二次复合酶酶解,酶解反应温度为45~55℃,酶解反应太阳城集团为2~5小时,并在酶解过程中进行超声振荡处理,超声频率为2KHz,超声功率为400~800W,待酶解反应结束,升温至80~90℃灭酶10~20分钟,得到二次酶解液。

优选的,所述步骤四中的二次复合酶采用半纤维素酶+糖化酶,所述半纤维素酶和糖化酶的用量为1:2~4,且二次复合酶的加酶量为山核桃粉原料用量的2000~3000u/g。

优选的,所述步骤五中二次提取的条件为:碱提料液比1g:5~10mL,碱提pH9~12,碱提温度45~55℃,碱提太阳城集团1~3h。

太阳城集团优选的,所述步骤六中酸沉过程为:将一次蛋白液和二次蛋白液混匀,加入盐酸或柠檬酸调节pH至4.5进行酸沉,酸沉温度为20~30℃,待出现絮状物后离心分离得到蛋白粉。

本发明与现有技术相比,其有益效果是:

(1)通过采用由半纤维素酶+原果胶酶+果胶甲酯水解酶+果胶酸酶组成的一次复合酶进行一次酶解,以及采用由半纤维素酶+糖化酶组成的二次复合酶进行二次酶解,可有效破坏山核桃粉细胞的细胞壁,使得细胞内的蛋白更易提取,相较于使用单一酶进行酶解,可有效提高山核桃蛋白的提取率。

(2)通过对一次酶解液进行微波处理,以及在二次酶解过程中同时进行超声振荡处理,以提供合适的微环境来溶解蛋白质,极大缩短了酶解反应太阳城集团,增加了山核桃蛋白的纯度。

(3)该酶法制备山核桃油的方法,工艺安全、制备便捷,山核桃蛋白提取率可达70.0%以上、提取的山核桃蛋白纯度高达90.0%以上。

附图说明

太阳城集团图1是本发明所述酶法制备山核桃蛋白的方法的工艺流程图。

具体实施方式

太阳城集团下面结合附图对本发明做进一步的详细说明,以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。

如图1所示,本发明提供了一种酶法制备山核桃蛋白的方法,包括如下步骤:

太阳城集团步骤一、山核桃粉原料的制备:将山核桃去壳后采用六号溶剂浸泡,脱溶后得到脱脂的山核桃粕,其残油量为1.4~2.0%,并将脱脂的山核桃粕粉碎过筛得到颗粒大小为100~150目筛的山核桃粉原料。

步骤二、一次酶解:将山核桃粉原料和水按料液比1g:15~25mL混匀制得一次浆液,在一次浆液中加入盐酸或柠檬酸将一次浆液pH调至3~5,并加入一次复合酶酶解,酶解反应温度为50~60℃,酶解反应太阳城集团为4~8小时,待酶解反应结束,升温至80~90℃灭酶10~20分钟,得到一次酶解液,并对一次酶解液进行微波处理,微波功率为250~500W,微波太阳城集团为15~25分钟,得到微波酶解液;其中,所述一次复合酶采用半纤维素酶+原果胶酶+果胶甲酯水解酶+果胶酸酶,所述半纤维素酶、原果胶酶、果胶甲酯水解酶和果胶酸酶的用量为1:3~6:2~4:4~8,且一次复合酶的加酶量为山核桃粉原料用量的1000~2000u/g。

步骤三、一次提取:将微波酶解液进行一次碱提,碱提料液比1g:15~25mL,碱提pH9~12,碱提温度45~55℃,碱提太阳城集团2~4h,得到一次碱提液,并将其离心分离得到一次蛋白液和残渣沉淀。

太阳城集团步骤四、二次酶解:将残渣沉淀和水按1g:4~8mL混匀制得二次浆液,在二次浆液中加入盐酸或柠檬酸将二次浆液pH调至4~5,加入二次复合酶酶解,酶解反应温度为45~55℃,酶解反应太阳城集团为2~5小时,并在酶解过程中进行超声振荡处理,超声频率为2KHz,超声功率为400~800W,待酶解反应结束,升温至80~90℃灭酶10~20分钟,得到二次酶解液;其中,所述二次复合酶采用半纤维素酶+糖化酶,所述半纤维素酶和糖化酶的用量为1:2~4,且二次复合酶的加酶量为山核桃粉原料用量的2000~3000u/g。

太阳城集团步骤五、二次提取:将二次酶解液进行二次碱提,碱提料液比1g:5~10mL,碱提pH9~12,碱提温度45~55℃,碱提太阳城集团1~3h,得到二次碱提液,并将其离心分离得到二次蛋白液。

步骤六、酸沉:将一次蛋白液和二次蛋白液混匀,加入盐酸或柠檬酸调节pH至4.5进行酸沉,酸沉温度为20~30℃,待出现絮状物后离心分离得到蛋白粉。

步骤七、冷冻干燥:将蛋白粉进行冷冻干燥处理,即得山核桃蛋白。

本发明与现有技术相比,其有益效果是:通过采用由半纤维素酶+原果胶酶+果胶甲酯水解酶+果胶酸酶组成的一次复合酶进行一次酶解,以及采用由半纤维素酶+糖化酶组成的二次复合酶进行二次酶解,可有效破坏山核桃粉细胞的细胞壁,使得细胞内的蛋白更易提取,相较于使用单一酶进行酶解,可有效提高山核桃蛋白的提取率;通过对一次酶解液进行微波处理,以及在二次酶解过程中同时进行超声振荡处理,以提供合适的微环境来溶解蛋白质,极大缩短了酶解反应太阳城集团,增加了山核桃蛋白的纯度;该酶法制备山核桃油的方法,工艺安全、制备便捷,山核桃蛋白提取率可达70.0%以上、提取的山核桃蛋白纯度高达90.0%以上。

实施例1:

将山核桃去壳后采用六号溶剂浸泡,脱溶后得到脱脂的山核桃粕,其残油量为1.4%,并将脱脂的山核桃粕粉碎过筛得到颗粒大小为125目筛的山核桃粉原料;将山核桃粉原料和水按料液比1g:25mL混匀制得一次浆液,在一次浆液中加入盐酸或柠檬酸将一次浆液pH调至5,并加入一次复合酶酶解,酶解反应温度为50℃,酶解反应太阳城集团为6小时,待酶解反应结束,升温至90℃灭酶10分钟,得到一次酶解液,并对一次酶解液进行微波处理,微波功率为375W,微波太阳城集团为20分钟,得到微波酶解液;其中,所述一次复合酶采用半纤维素酶+原果胶酶+果胶甲酯水解酶+果胶酸酶,所述半纤维素酶、原果胶酶、果胶甲酯水解酶和果胶酸酶的用量为1:3:4:6,且一次复合酶的加酶量为山核桃粉原料用量的1500u/g;将微波酶解液进行一次碱提,碱提料液比1g:25mL,碱提pH10,碱提温度55℃,碱提太阳城集团4h,得到一次碱提液,并将其离心分离得到一次蛋白液和残渣沉淀;将残渣沉淀和水按1g:8mL混匀制得二次浆液,在二次浆液中加入盐酸或柠檬酸将二次浆液pH调至4,加入二次复合酶酶解,酶解反应温度为55℃,酶解反应太阳城集团为3小时,并在酶解过程中进行超声振荡处理,超声频率为2KHz,超声功率为600W,待酶解反应结束,升温至90℃灭酶10分钟,得到二次酶解液;其中,所述二次复合酶采用半纤维素酶+糖化酶,所述半纤维素酶和糖化酶的用量为1:2,且二次复合酶的加酶量为山核桃粉原料用量的3000u/g;将二次酶解液进行二次碱提,碱提料液比1g:10mL,碱提pH10,碱提温度55℃,碱提太阳城集团3h,得到二次碱提液,并将其离心分离得到二次蛋白液;将一次蛋白液和二次蛋白液混匀,加入盐酸或柠檬酸调节pH至4.5进行酸沉,酸沉温度为20℃,待出现絮状物后离心分离得到蛋白粉;将蛋白粉进行冷冻干燥处理,即得山核桃蛋白;其中,山核桃蛋白提取率为72.9%,纯度为91.8%。

实施例2:

太阳城集团将山核桃去壳后采用六号溶剂浸泡,脱溶后得到脱脂的山核桃粕,其残油量为1.7%,并将脱脂的山核桃粕粉碎过筛得到颗粒大小为100目筛的山核桃粉原料;将山核桃粉原料和水按料液比1g:20mL混匀制得一次浆液,在一次浆液中加入盐酸或柠檬酸将一次浆液pH调至4,并加入一次复合酶酶解,酶解反应温度为60℃,酶解反应太阳城集团为4小时,待酶解反应结束,升温至80℃灭酶15分钟,得到一次酶解液,并对一次酶解液进行微波处理,微波功率为250W,微波太阳城集团为25分钟,得到微波酶解液;其中,所述一次复合酶采用半纤维素酶+原果胶酶+果胶甲酯水解酶+果胶酸酶,所述半纤维素酶、原果胶酶、果胶甲酯水解酶和果胶酸酶的用量为1:6:3:4,且一次复合酶的加酶量为山核桃粉原料用量的2000u/g;将微波酶解液进行一次碱提,碱提料液比1g:20mL,碱提pH9,碱提温度50℃,碱提太阳城集团3h,得到一次碱提液,并将其离心分离得到一次蛋白液和残渣沉淀;将残渣沉淀和水按1g:6mL混匀制得二次浆液,在二次浆液中加入盐酸或柠檬酸将二次浆液pH调至5,加入二次复合酶酶解,酶解反应温度为50℃,酶解反应太阳城集团为5小时,并在酶解过程中进行超声振荡处理,超声频率为2KHz,超声功率为400W,待酶解反应结束,升温至80℃灭酶15分钟,得到二次酶解液;其中,所述二次复合酶采用半纤维素酶+糖化酶,所述半纤维素酶和糖化酶的用量为1:4,且二次复合酶的加酶量为山核桃粉原料用量的2000u/g;将二次酶解液进行二次碱提,碱提料液比1g:7.5mL,碱提pH9,碱提温度50℃,碱提太阳城集团2h,得到二次碱提液,并将其离心分离得到二次蛋白液;将一次蛋白液和二次蛋白液混匀,加入盐酸或柠檬酸调节pH至4.5进行酸沉,酸沉温度为25℃,待出现絮状物后离心分离得到蛋白粉;将蛋白粉进行冷冻干燥处理,即得山核桃蛋白;其中,山核桃蛋白提取率为71.2%,纯度为92.5%。

实施例3:

太阳城集团将山核桃去壳后采用六号溶剂浸泡,脱溶后得到脱脂的山核桃粕,其残油量为2.0%,并将脱脂的山核桃粕粉碎过筛得到颗粒大小为150目筛的山核桃粉原料;将山核桃粉原料和水按料液比1g:15mL混匀制得一次浆液,在一次浆液中加入盐酸或柠檬酸将一次浆液pH调至3,并加入一次复合酶酶解,酶解反应温度为55℃,酶解反应太阳城集团为8小时,待酶解反应结束,升温至85℃灭酶20分钟,得到一次酶解液,并对一次酶解液进行微波处理,微波功率为500W,微波太阳城集团为15分钟,得到微波酶解液;其中,所述一次复合酶采用半纤维素酶+原果胶酶+果胶甲酯水解酶+果胶酸酶,所述半纤维素酶、原果胶酶、果胶甲酯水解酶和果胶酸酶的用量为1:4:2:8,且一次复合酶的加酶量为山核桃粉原料用量的1000u/g;将微波酶解液进行一次碱提,碱提料液比1g:15mL,碱提pH12,碱提温度45℃,碱提太阳城集团2h,得到一次碱提液,并将其离心分离得到一次蛋白液和残渣沉淀;将残渣沉淀和水按1g:4mL混匀制得二次浆液,在二次浆液中加入盐酸或柠檬酸将二次浆液pH调至4.5,加入二次复合酶酶解,酶解反应温度为45℃,酶解反应太阳城集团为2小时,并在酶解过程中进行超声振荡处理,超声频率为2KHz,超声功率为800W,待酶解反应结束,升温至85℃灭酶20分钟,得到二次酶解液;其中,所述二次复合酶采用半纤维素酶+糖化酶,所述半纤维素酶和糖化酶的用量为1:3,且二次复合酶的加酶量为山核桃粉原料用量的2500u/g;将二次酶解液进行二次碱提,碱提料液比1g:5mL,碱提pH12,碱提温度45℃,碱提太阳城集团1h,得到二次碱提液,并将其离心分离得到二次蛋白液;将一次蛋白液和二次蛋白液混匀,加入盐酸或柠檬酸调节pH至4.5进行酸沉,酸沉温度为30℃,待出现絮状物后离心分离得到蛋白粉;将蛋白粉进行冷冻干燥处理,即得山核桃蛋白;其中,山核桃蛋白提取率为73.6%,纯度为90.3%。

太阳城集团尽管本发明的实施方案已公开如上,但其并不仅限于说明书和实施方式中所列运用,它完全可以被适用于各种适合本发明的领域,对于熟悉本领域的人员而言,可容易地实现另外的修改,因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下,本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。

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